大肠杆菌基因组 DNA提取试剂盒(CTAB沉淀法)説明书

大肠杆菌基因组 DNA提取试剂盒(CTAB沉淀法)

一、产品简介：

大肠杆菌(Escherichia coli，E.coli)属于革兰氏阴性短杆菌，大小0.5×1~3微米，周生鞭毛，能运动，无芽孢，能发酵多种糖类产酸、产气，是人和动物肠道中的正常栖居菌，婴儿出生后即随哺乳进入肠道，与人终身相伴，几乎占粪便干重的1/3，获得DNA的量很高，纯度一般但足够用于大多数分子生物学实验，CTAB是一种阳离子去污剂，在高离子强度的溶液里CTAB与蛋白质和大多数酸性多聚糖以外的多聚糖形成复合物,只是不能沉淀核酸，因此CTAB可从产生粘多糖的有机体如植物及某些革兰氏阴性菌中制备纯化DNA。

雅吉生物大肠杆菌基因组DNA提取试剂盒(CTAB沉淀法)是简便的利用CTAB取大肠杆菌基因组DNA的试剂盒，其提取原理是利用蛋白酶K消化蛋白，CTAB沉淀多糖，再经加热使蛋白变性与DNA分离，乙醇沉淀核酸获得基因组DNA，可进行酶切、PCR等下游实验。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

二、产品组成：

三、自备材料：

1、离心管

2、离心机

3、摇床

4、恒温箱或水浴锅

5、70%乙醇

四、操作步骤(仅供参考)：

1、准备工作∶取0.5ml TE Buffer加至蛋白酶K中，充分混匀，配制成20mg/ml的白酶K溶液，可分装成小份，-20保存1年有效。

2、取1.5ml菌液置于EP管，10000g 离心2min，弃上清液，再次加入1.5ml菌液，重复该步骤1次。

3、加入30ul Eco裂解液和3l白酶K溶液(20mg/ml)，充分混匀，37C孵育1h.

4、加入180ul CTAB沉淀液，充分混匀，65C孵育10min。

5、加入780ul蛋白清除液，充分混匀，12000g离心5~10min。

6、转移上清至新EP管，加入2倍体积的Eco漂洗液，混匀，-20℃放置30min或过夜。

7、13000g 离心10min，弃上清液，加入70%乙醇洗涤沉淀。

8、13000g离心10min，弃上清液，室温干燥DNA沉淀，加入100ul或适量TE Buffer ,溶解沉淀，-20℃保存;TE Buffer体积越大，DNA浓度越低。

五、注意事项:

1、用于裂解的噬菌体、宿主菌越新鲜，裂解越好、收获量越大。

2、Eco 裂解液在低温条件下会凝固，可用40~50C温水助溶。

3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

六、有效期∶6个月有效。