流式抗体（荧光抗体）细胞染色步骤与注意事项

流式抗体（荧光抗体）细胞染色步骤与注意

染色缓冲液（BSA）的配制：

PBS含有1% FBS和0.09% NaN3，置于冰上或4度冰箱备用。

准备单细胞悬液：淋巴组织、骨髓、血液或培养的细胞。

用冰染色缓冲液洗细胞2次，离心细胞，用冰染色缓冲液重悬细胞，使终浓度为2×107细胞/ml。

各取50ul（106细胞）细胞悬液到2个圆底的Ep管中。

根据抗体说明书在其中1个Ep管中加入合适的抗体量，另外1个加入同型对照抗体，冰上避光孵育20分钟（建议每5分钟轻轻混匀，以免细胞沉积）。根据荧光抗体的亲和力适当延长染色时间。

用1ml染色缓冲液洗2次去除未结合的抗体，300×g离心5分钟，每次离心后小心吸取上清。

用适量染色缓冲液（如500ul）重悬细胞。

流式细胞仪分析染色结果（不超过4小时）。如果暂时无法检测，也可以将染色后的细胞用4%多聚甲醛固定后，避光储存在4度。固定后的细胞可以保存zui多一个星期。