慢病毒感染细胞--感染效率为什么那么差

慢病毒感染细胞|为什么你的感染效率那么差?

慢病毒不但可感染分裂或非分裂细胞，还可将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而实现持久表达，

又不易引发机体免疫反应，被誉为细胞实验佳选的工具病毒。

并且慢病毒作为基因治疗载体在各类遗传性和后天性的人类疾病的治疗中倍受欢迎：从基础研究到临床应用，高纯度、高滴度的慢病毒都是基因操作的理想工具。

由于实验中使用的细胞类型不同，慢病毒感染的效率也会有差异；要想提高慢病毒的感染效率，合适的实验步骤和最佳的实验条件是成功的关键！

以“24孔培养板、贴壁细胞"为例，慢病毒感染细胞的常规操作步骤是这样的：

Day 0

接种细胞：

每孔按5×个待感染细胞铺板，用含有 10% FBS的DMEM培养基培养;

Day 1

细胞感染：

感染前，根据说明书用培养基配置感染液，备用吸掉旧培养基，更换为感染液; 并参考细胞 MOI值，计算病毒使用量，加入病毒进行感染，混匀;

Day 2

病毒感染8-16h后，换回常规培养基，继续培养;

Day 3-4

确认感染效果：

感染72h后，显微镜下观察感染效果，如EGFP、Cherry的表达情况；

如果你以为所有的细胞操作都这么简单的话，那真的是too young too simple！

那么在慢病毒感染细胞过程中，到底会遇到哪些问题呢？

在细胞感染时， MOI是一个非常重要的指标，如何确定MOI值呢？

MOI:复感染指数，是指病毒对细胞的感染能力，MOI越高，细胞越难被感染。通常把某株细胞有80%被感染时所用的病毒颗粒数和细胞数目

的比值作为该株细胞的MOI。

MOI=（病毒滴度×病毒体积）/细胞数目

感染条件及MOI的选择原则：

1. 在细胞形态不受影响的情况下尽可能用少的病毒感染细胞

2. 选择感染效率80%左右的作为最佳感染条件

通过细胞感染预实验可以知道慢病毒对细胞的最佳感染条件，来确定细胞的MOI，进行正式实验。