细胞冻存时间过长如何复苏

复苏流程

01准备工作

确保实验环境整洁，所需仪器设备如净化工作台、离心机、恒温水浴箱、培养箱等处于良好状态。

准备适量的新鲜培养基，置于37℃培养箱中预热。

02取出冻存管

从液氮罐或-80℃冰箱中迅速取出冻存管，注意佩戴防护手套和护目镜，以防冻伤和液氮溅射。

03快速解冻

将冻存管直接放入预热至37℃的恒温水浴锅中，不时摇动以加速融化。注意不要让水浴锅的水接触到冻存管的管口，以防污染。

融化时间应控制在2分钟内，以减少细胞在解冻过程中受到的损伤。

04消毒与转移

解冻后，用75%酒精擦拭冻存管外部进行消毒，晾干后打开瓶盖。

将融化的细胞悬液用吸管或移液枪转移至含有适量培养基的离心管中。

05离心与重悬

根据细胞类型和离心机的要求，选择合适的离心速度和时间进行离心。一般情况下，低速离心5分钟即可。

离心后，弃去上清液中的DMSO等冷冻保护剂，加入新鲜培养基重悬细胞。

06接种与培养

将重悬后的细胞接种至培养皿或培养瓶中，置于37℃、5% CO₂的培养箱中进行培养。

根据细胞类型和生长情况，适时更换新鲜培养基，去除死细胞和代谢废物。

注意事项

01无菌操作

整个复苏过程必须严格进行无菌操作，以防止细胞污染。

02控制时间

解冻时间不宜过长，以免细胞受到损伤。同时，解冻后的细胞应尽快接种至培养皿中，以减少在常温下的暴露时间。

03调整细胞浓度

如果复苏后的细胞浓度过低，可以通过离心后调整细胞浓度来提高细胞的生长速度。

04观察与记录

复苏后应定期观察细胞的生长情况，包括形态、密度和生长速度等。同时，详细记录复苏细胞的名称、数量、复苏时间、存放部位等信息，以便后续跟踪和管理。

05使用合适的培养基

根据细胞类型和复苏后的培养需求选择合适的培养基，以保证细胞能够正常生长。