Golden 1st cDNA Synthesis Kit试剂

Golden 1st  cDNA Synthesis Kit试剂第一链反转录试剂盒采用稳定高效的反转录预混体系5×Golden RT MasterMix进行RNA的反转录反应，使用时只需加入模板

、引物和RNase Free H2O 即可，大大简化了操作过程、提高了效率、减少了操作过程中的人为误差。

MasterMix中添加了HL dsDNase（热敏双链特异性核酸酶），该双链特异性核酸酶（又名gDNA Remover）

可在反转录的过程中，直接降解去除RNA中残留的基因组DNA污染(可去除100ng基因组DNA)，

从而在定量PCR的检测中无需考虑基因组污染的干扰，设计的定量PCR引物也无需进行横跨外显子。

该试剂盒尤其适用于定量PCR检测。

该预混体系包含点突变致RNase H活性缺失的Golden MLV Reverse Transcriptase反转录酶、dNTP、反应Buffer、

gDNA去除试剂和RNase Inhibitor。该试剂盒采用的反转录酶去除了RNase H活性，从而避免反转录过程中降解RNA。

同时经过突变文库筛选，使得其热稳定性更强，可耐受55℃高温反应。相比于低温条件下反转录反应，

采用高温反转录可显著打开RNA二级结构，从而提高复杂RNA模板的扩增性能、提高反转录cDNA的长度和产量，

从而提高后续检测的灵敏度。合成的第一链cDNA可广泛用于2nd Strand的合成、杂交、PCR扩增、Real-Time PCR反应等。

组分

组分名称数量

5XGolden RT MasterMix (with dsDNase)400 μl

20XOligo dT(25)&Random Primer100 μl

Rnase Free H2O1 ml×2

注：1.该制品可有效反转录mRNA、tRNA、LncRNA、ncRNA。

  2. 该制品不可反转录microRNA、病毒DNA/RNA样品。

主要特征

dsDNase有效去除基因组的污染，抑制了因基因组污染引起的非特异性扩增

55℃进行反转录的MLV反转录酶，能更好的转录含有复杂高级结构的RNA模板

高效便捷的反转录预混体系

反转录引物为Random Primer和Oligo dT Primer预混的RT Primer Mix，可更好的合成样品中的各种cDNA

储存

2-8℃避光保存，可保存2年。

Golden 1st  cDNA Synthesis Kit试剂恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

应用实例3：A3825-01 红黄变色反应（肉眼观察）

以 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起

始前，下图为 65 度反应 30min 后。

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