T5核酸外切酶试剂

T5核酸外切酶试剂，它可降解双链DNA、单链DNA和缺刻的质粒DNA。它既能从5’-末端起始降解DNA，也能从线性或环状双链DNA的切刻或缺口处起始降解DNA，但不能降解超螺旋双链DNA。基于以上特性，T5核酸外切酶可应用于Gibson组装。

单位定义

1单位指在50μl反应体系，37℃条件下，30分钟内能从双链DNA底物上催化产生1nmol的酸可溶性脱氧核糖核苷酸所需要的酶量。

组分

名称数量

T5 Exonuclease (10U/μl)100μl

10×T5 Exo Buffer1ml

储存

置于-20°C，可保存3年。

使用注意事项

（1）1× T5 Exo Buffer：50mM KAc，20mM Tris-Ac pH 7.9，10mM Mg(Ac)2，1mM DTT。该酶在PCR Buffer中也具有活性。

（2）该酶的最佳反应温度为37°C，在50°C也具有一定活性，因此可用于Gibson组装。

T5核酸外切酶试剂恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

应用实例3：A3825-01 红黄变色反应（肉眼观察）

以 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起

始前，下图为 65 度反应 30min 后。

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