热敏双链DNA特异性核酸酶(HL dsDNase)试剂

热敏双链DNA特异性核酸酶(HL dsDNase)试剂，又名ezDNase或HL dsDNase)，为双链特异性核酸酶。

它可特异性地识别降解双链DNA，对单链DNA或RNA几乎无活性，其降解dsDNA的能力比ssDNA高~5000倍。此外，

该双链DNA特异性核酸酶降解双链DNA的能力比bovine DNaseI高~30倍，从而特别适用于去除RNA样品中的基因组DNA污染

。该热敏双链DNA核酸酶可将DNA降解为2~8bp的产物，且55℃ 5min可使该酶不可逆失活，

同时又能保持RNA和ssDNA的稳定性。另外，该酶适合于对基因组样品进行酶法片段化反应。

单位定义

1单位指25°C条件下15min将10μg基因组DNA消化至80%的产物<500bp所需的酶量。

组分

名称数量

HL dsDNase (2 U/μl)50 μl/500 μl

10×dsDNase Buffer1 ml /2 ml

储存

置于-20°C，可保存3年。

使用注意事项

（1）1×dsDNase Buffer：20mM Tris-HCl pH8.0, 5mM MgCl2。该酶需要1~5mM MgCl2。

（2）该酶对K+敏感，反应体系中推荐K+浓度低于40 mM。

（3）通常在RT反应中的用量为0.1~0.5U/20 μl体系。

（4）任何浓度的SDS、盐酸胍均抑制该酶活性。

（5）该酶的最佳反应温度为25~37℃，42℃ 30min后活性损失70%。

热敏双链DNA特异性核酸酶(HL dsDNase)试剂恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

应用实例3：A3825-01 红黄变色反应（肉眼观察）

以 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起

始前，下图为 65 度反应 30min 后。

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