酵母焦磷酸酶试剂

酵母焦磷酸酶试剂纯化自重组 E. coli 菌株，携带有从酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）克隆的 ppa 基因和蟾分枝

杆菌（Mycobacterium xenopi）GyrA 内含肽的融合基因。该焦磷酸酶催化无机焦磷酸盐水解生成正磷酸盐

：P207–4 + H20 →2HP04–2。在核酸扩增实验中，其可解除生成的无机焦磷酸盐对反应体系的抑制。

组分

组分名称数量

Yeast Pyrophosphatase (0.1 U/μl)200 μl/1 ml

应用

反转录反应中提高 RNA 产量

增强 DNA 复制

活性定义

1 单位指标准反应条件下（20mM Tris-HCl，pH 7.5，2mM MgCl2，2mM PPi，25℃ 反应 10 分钟）每分钟催化无机焦磷酸盐生成1μmol 磷酸盐所需的酶量。

储存

-20℃可保存3年。

使用注意事项

（1） 该酶在多种反应Buffer中均具有活性，通常该酶在HDA扩增、LAMP扩增等实验中，可直接接入即可。

（2） 该酶的用量在不同的实验中需要优化，通常在0.05~1U/ml浓度调整。

（3） 该酶的最佳反应温度为25℃，其在16~37℃均有活性，65℃ 10min可使该酶失活。

酵母焦磷酸酶试剂恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

应用实例3：A3825-01 红黄变色反应（肉眼观察）

以 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起

始前，下图为 65 度反应 30min 后。

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