CCK-8细胞增殖和凋亡检测试剂

CCK-8细胞增殖和凋亡检测试剂增殖与毒性检测试剂是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性检测的试剂，因其操作简单快速、高灵敏度且细胞毒性低等成为替代MTT法检测细胞生长密度的最好方法。该试剂盒利用水溶性四唑盐-WST?-8在电子载体1-Methoxy PMS存在的情况下能够被还原成水溶性的甲臜染料，生成的甲臜量与活细胞数量成正比。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

优势

灵敏度高，数据重复性好

操作简单，安全性高

细胞毒性低，无需放射性同位素

单一组分，无需配制

应用

细胞增殖测定、细胞毒性测定、药物筛选、肿瘤药敏试验

储存

-20℃避光可保存2年，融化后 4℃避光放置可保存 1 年。反复冻融会增加背景值。

注意事项

1. 接种时注意细胞悬液一定要混匀，以避免细胞沉淀下来，导致每孔中的细胞数量不等，可以每接种几个孔就混匀一下。培养板周围一圈孔培养基容易挥发，为了减少误差，建议培养板的四边每孔只加培养基或PBS，而不作为指标检测孔。

2. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，如果待检测体系中存在较多的还原剂，例如一些抗氧化剂会干扰检测，需设法去除。

3. 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。

4. 培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。一般情况下，白细胞较难染色，因此需要较长的培养时间或增加细胞数量 (～105个细胞/孔)。悬浮细胞与贴壁细胞相比较难染色。对于悬浮细胞，在培养1- 4小时后，可先从培养箱中取出，目察染色程度或用酶标仪测定决定。若染色困难，可将培养板放回培养箱，继续培养数小时后再确定。 染色的最佳时间可定为悬浮细胞的最佳培养时间。对于贴壁细胞，培养时间一般为1-4小时，但在培养30分钟左右即可取出肉眼观察染色程度 (根据细胞种类而定，需要摸索一下条件)。

5. 若细胞培养时间较长，培养基颜色发生变化或 pH发生变化，建议更换新鲜的培养基后再加CCK-8试剂。

CCK-8细胞增殖和凋亡检测试剂恒温扩增使用策略及实例展示

应用实例1：在以A3824-03或 A3828-03，用 LP1002引物组进行的LAMP测试。Bst4.0 SYBR Green试剂可在标准定量PCR仪或恒温荧光仪上进行反应。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应25min的检测结果，可以看到检测反应<20min(达平台期)。

应用实例2： 用 LP1002引物组进行的LAMP测试。OG变色法为终点变色策略，在反应结束后，倒置反应管，溶解管盖上染料后，阳性样本呈现出醒目的绿色，阴性表现出橙色，区分明显。且该方法不受样本类型限制，杂质耐受性很好。以体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、100、1000、10e4和10e6Copies，NTC为ddH2O为模板。下图为65℃反应20min后检测结果。

应用实例3：A3825-01 红黄变色反应（肉眼观察）

以 体外转录 RNA 为模板，1-6分别为1、10 、100、1000、104和106Copy，NTC为ddH2O为模板。 上图为加样结束反应起

始前，下图为 65 度反应 30min 后。

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